Pentru a determina diluția potrivită a probei de plasmă sanguină în metoda Bradford, este important să aveți la dispoziție o curbă de etalonare. Această curba este obținută prin măsurarea absorbției la lungimea de undă specifică pentru acidul bromotimol (595 nm) la diferite concentrații cunoscute de albumină bovină serică (BSA), care este adesea utilizată ca standard în această metodă.
1. Începeți prin pregătirea soluției de etalon (BSA) la concentrații cunoscute (de exemplu, 0,2 mg/ml, 0,4 mg/ml, 0,6 mg/ml etc.).
2. Măsurați absorbția fiecărei soluții etalon la 595 nm pentru a crea curba de etalonare.
3. După obținerea curbei, măsurați absorbția probei de plasmă sanguină neatenuată la aceeași lungime de undă.
4. Alegeți punctul de pe curba de etalonare care corespunde absorbției probei neatenuate.
5. Calculați raportul dintre concentrația de proteină a probei neatenuate și concentrația corespunzătoare de pe curba de etalonare.
6. Determinați diluția necesară pentru a încadra absorbția probei neatenuate în intervalul corespunzător de pe curba de etalonare.
Este important să efectuați diluții succesive, măsurând absorbția după fiecare diluție, până când obțineți o absorbție în intervalul de pe curba de etalonare. Acest proces va asigura o măsurare precisă a concentrației de proteină din plasmă sanguină folosind metoda Bradford.
